2024-10-17
급성 호흡기 감염은 어린이의 호흡기 질환으로 바이러스에 의해 종종 발생합니다.호흡기 합동 바이러스 (RSV) 와 호흡기 아데노 바이러스 (ADV) 는 어린이의 급성 호흡기 감염을 일으키는 두 가지 일반적인 병원체입니다.가벼운 경우에는 기침 및 코에서 흐르는 것과 같은 감기 증상이 나타날 수 있으며 심한 경우에는 폐렴 및 오티스 미디어와 같은 심각한 합병증이 발생할 수 있습니다.세계 보건 기구의 권고에 따르면, 병원균 검출은 빠르고 정확하고 민감하고 특정해야 하며 전문 기술자나 큰 기기에 의존해서는 안됩니다.특히 RSV와 ADV를 검출하는 방법을 개발하는 것이 특히 중요합니다. 이러한 검출 요구 사항을 충족시킬 수 있습니다..
The research group of Director Ma Dongli of the Institute of Pediatrics of Shenzhen Children's Hospital published an article "A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus" in the journal "Scientific Reports", 영향 인수는 4입니다.6.
연구 개요
멀티 효소 동열 급성 핵산 증폭 기술 MIRA는 CRISPR/Cas 검출 시스템과 결합된다. MIRA 프라이머와 CRISPR RNA (crRNA) 를 설계함으로써,복수의 순서 비교를 수행합니다., 반응 조건을 최적화하고 감수성과 특수성을 확인하기 위해 형광 수치 탐지 장치를 사용합니다.
그리고 qPCR 결과를 비교 대책으로 사용해서 160개의 임상 목 스냅 샘플의 검사 결과의 일관성을 연구했습니다.
실험 결과
1MIRA-CRISPR/Cas12a 탐지 방법의 민감성과 특수성
MIRA 방법 검출에서 RSV-F1/R1 프라이머 페어는 RSV, ADV, PIV, RhV, MP, CP, FluB, hMPV, FluA 또는 RSV/ADV 동감염 환자의 목구멍 스냅 샘플에서 핵산을 증폭하는 데 사용됩니다.RSV와 ADV를 제외한 경우, 증폭된 대역을 가지고 있었지만 다른 결과는 부정적이었고, 선택 된 MIRA 프라이머가 테스트 된 다른 8 개의 병원체와 교차 반응하지 않았으며 잘 보존되었다는 것을 나타냅니다.
그 후 RSV와 ADV의 재조합 플라스미드는 불균형 물을 사용하여 10배 분해되었고, RSV와 ADV의 검출 경계는 모두 10배였습니다.6복사본/mL
(1-10: RSV, RSV/ADV 동감염 환자 및 다른 호흡기 병원체 샘플에서 목구멍 스랩 샘플)
2qPCR와 비교해 보세요.
qPCR 방법과 비교하면 RSV와 ADV의 검출 한도는 모두 10입니다.3복사본/mL
(RSV와 ADV의 qPCR 검출의 민감도)
MIRA-CRISPR 방법은 기초 연구소에 더 적합하며, 검출 시간이 짧고, 조작이 간단하며, 실험 작업을 완료하기 위해 대규모 qPCR 기기가 필요하지 않습니다.
3임상 표본 비교
급성 호흡기 감염을 앓고 있는 160명의 어린이로부터 목구멍 스냅 샘플을 수집했습니다. 동시에 MIRA-CRISPR 방법과 qPCR 방법을 사용하여그리고 그 결과는 임상실험 결과와 비교되었습니다..
qPCR 방법과 비교했을 때, RSV와 ADV에 대한 MIRA-CRISPR 방법의 민감도는 각각 98.1%와 91.4%이며 검출 특성이 100%였습니다.95, 높은 수준의 일관성을 나타냅니다.
MIRA-CRISPR 방법은 RSV와 ADV의 신속하고 민감하고 특정 검출의 장점을 가지고 있습니다. 바이러스 감염을 신속하고 정확하게 검출 할 수 있습니다.그리고 의료자원이 부족한 지역에서 사용하기에 더 적합합니다.
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